香水柠檬、大叶种茶、绣球、滇黄精上病害的病原鉴定

为有效防控作物侵染性病害，精准鉴定病原是科学防治的关键前提。日前，科研人员针对生产中危害严重的几种作物病害展开攻关，通过技术手段明确了其病原物，为病害精准诊断与绿色防控提供了重要依据。

1.广东香水柠檬白皮病病原菌为Didymella americana

为明确广东省香水柠檬果实白皮病的病原，广东省农业科学院植物保护研究所/农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室/广东省植物保护新技术重点实验室采用常规组织分离法，对患有白皮病的香水柠檬果实进行分离鉴定。基于ITS、LSU和TUB2基因序列联合构建的系统发育分析结果显示，分离自柠檬果实上的NM005菌株与Didymella americana聚在一个进化支上，在最大似然法系统发育树进化支上支持率为82%，在贝叶斯系统发育树进化支上支持率为88%。同时，根据柯赫氏法则对分离菌株NM005进行了致病性测定。

结果显示，该菌株可以使健康果实发病，且症状与大田症状相似。从接种后发病的果实上再次分离得到的菌株与接种菌的形态特征一致，说明原分离菌为引起柠檬果实白皮病的病原菌。经形态学及分子生物学鉴定，确定分离菌株为Didymella americana。该发现为香水柠檬果实白皮病的田间防治提供了理论依据。

2.云南大叶种茶树炭疽病病原菌为喀斯特炭疽菌

茶炭疽病是危害大叶种茶树的主要病害之一，发病严重时可对产量和品质造成严重影响。科研人员在云南省临沧市沙河乡茶园中采集到一类具有炭疽症状的病叶，采用常规组织分离法进行病原分离纯化，通过科赫氏法则验证并结合分子生物学及形态学鉴定，以确定致病原；采用稀释分离法从云南大叶种茶树植株中分离内生菌，通过平板对峙试验，筛选具有拮抗作用的生防菌株。

结果表明，分离到的MTTJ-Ⅴ菌株能够侵染茶树，并引起相同炭疽症状；结合形态特征和ITS、TUB2、ACT、GAPDH 多基因序列联合分析结果，最终将该病害的病原菌鉴定为喀斯特炭疽菌Colletotrichum karstii，发现喀斯特炭疽菌是云南大叶种茶炭疽病致病菌；从11 个茶树品种的茎叶中分离到161 株内生细菌，对喀斯特炭疽菌具有明显拮抗作用的有59 株，其中菌株CGJ-02 的抑菌率最高，可达73.73%±6.25%；通过形态学、生理生化及分子生物学方法，鉴定菌株CGJ-02 为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis；菌株CGJ-02 抑菌谱广，除喀斯特炭疽菌以外，还对山茶刺盘孢、山茶拟盘多毛孢等11 种病原真菌具有拮抗效果。

综上，该研究筛选获得的贝莱斯芽孢杆菌CGJ-02 菌株对云南大叶种茶树炭疽病致病菌MTTJ-Ⅴ菌株具有显著的生防活性，为茶树炭疽病的生物防治提供了优质的菌株资源。

3.云南绣球叶斑病病原菌为神农架鹅膏菌

为明确绣球叶斑病的致病菌及其生物学特性，探寻适宜的防治方法，西南林业大学园林园艺学院，云南省功能性花卉资源及产业化技术工程研究中心/国家林业和草原局西南风景园林工程技术研究中心/云南省面向南亚东南亚经济林全产业链联合研发中心/云南省森林灾控预警与控制实验室联合昆明杨月季园艺有限责任公司对绣球品种玛梅丽的叶斑病样本进行组织分离，纯化病原菌，基于柯赫氏法则验证，并利用基于ITS、LSU、TEF1等多基因序列构建的系统发育树分析，对病原菌进行鉴定。同时，采用菌丝生长速率法，研究温度、培养基、pH值、碳源、氮源、光周期对病原菌菌丝生长的影响，并测定其致死温度。此外，还测试了7种化学药剂对病原菌的抑制效果。

结果显示，分离到的绣球叶斑病病原菌为神农架鹅膏菌(Amanitashennongjiana)，其菌丝在25 ℃、马铃薯葡萄糖琼脂培养基，pH值为5，每日各12 h光、暗交替的条件下生长较好，其最适碳源为蔗糖，偏好不加氮，致死温度为65 ℃持续10 min。室内环境下，80%乙蒜素和80%波尔多液对该菌的抑制效果较好，其有效中浓度(EC₅₀)分别为1.9489、1.5918 mg·L^-1。该研究是对由神农架鹅膏菌引起的绣球叶斑病在中国的首次报道。

4.云南滇黄精炭疽病病原菌为平头炭疽菌

为明确云南省澜沧县滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)炭疽病的病原菌种类，了解其生物学特性，并筛选出有效防治药剂，为滇黄精炭疽病防控提供科学依据，云南农业大学植物保护学院联合云南农业大学园林园艺学院采集病样借助组织分离法和单孢分离法进行病原菌分离纯化；借助形态学特征观察、多基因(ITS、GAPDH、ACT、CHS-1和TUB2)序列分析和致病性测定鉴定病原菌；采用菌丝生长速率法并构建毒力回归方程，计算5种不同杀菌剂的抑菌活性，筛选效果显著的药剂。

结果表明，分离物C74形态特征与炭疽菌(Colletotrichum spp.)相似，经多基因联合构建系统发育进化树分析确定病原菌为平头炭疽菌(Colletotrichum truncatum)。生物学特性研究结果表明，供试培养条件下菌株C74最适生长的碳源为可溶性淀粉，氮源为蛋白胨，温度为28 ℃，光照条件为12 h光照/12 h黑暗。咪鲜胺、百克敏、氟啶胺3种药剂对炭疽病病原菌的菌丝生长均具有一定的抑制效果，其中氟啶胺的抑制作用最强，EC₅₀为2.020μg/mL；其次为咪鲜胺，EC₅₀为5.641μg/mL。

综合结果表明，引起云南省澜沧县滇黄精炭疽病的致病菌为平头炭疽菌(C.truncatum)。氟啶胺和咪鲜胺对该病原菌生长具有较好的抑制活性，可作为滇黄精炭疽病害防控备选药剂。